Od ponad dekady Stephen Colbert zajmuje centralne miejsce w nocnym paśmie telewizyjnym, gdzie ścierają się komedia, polityka i kultura. Gdy przygotowuje się, by po raz ostatni zasiąść za biurkiem, The Last Laugh kieruje obiektyw zarówno na program, jak i na samego prowadzącego, przyglądając się temu, co widzowie mogą stracić, gdy jedna z najbystrzejszych i najbardziej refleksyjnych postaci satyry żegna się z anteną. Godzinny program analizuje także szersze siły kulturowe i polityczne towarzyszące zakończeniu przygody Colberta z nocnym pasmem oraz przyszłość bezkompromisowej komedii w zmieniającym się krajobrazie. Osią programu jest dynamiczna grupa rozmówców ze świata komedii, dziennikarstwa i krytyki kultury. W programie występują Jake Tapper, prezenter CNN i główny korespondent stacji w Waszyngtonie, oraz komicy Jordan Carlos i Gianmarco Soresi, a także kluczowe osoby z zespołu kreatywnego The Colbert Report, w tym Allison Silverman i Richard Dahm, z których każda dzieli się spostrzeżeniami na temat skali i trwałego wpływu twórczości Colberta.